細胞系培養(yǎng)中常見的生物污染包括細菌污染、霉菌污染、支原體污染、黑點污染、真菌污染和原生動物污染。這些污染在細胞培養(yǎng)中的特點及相應(yīng)的解決辦法如下：
 

細菌污染
細菌在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細砂狀。根據(jù)感染菌的種類不同，可能會呈現(xiàn)不同的形狀，培養(yǎng)液一般會變得渾濁、黃色，對細胞生長有明顯影響。
解決方法：仔細檢查器具的滅菌情況，確保通風時間和高壓滅菌器的壓力是否足夠。重要的是，與培養(yǎng)基接觸的移液管等物品如果被污染兩次，則可能會導(dǎo)致儲存溶液也受到污染。所以一定要注意！下次使用前要檢查培養(yǎng)基的渾濁度。此外，建議在培養(yǎng)基中添加抗生素。
 
支原體污染
支原體是隱蔽的污染物，不能通過過濾去除。顯微鏡下沒有任何可見的支原體污染跡象，比如細胞病變和濁度或 pH 值變化（即使在嚴重污染的培養(yǎng)基中），這樣就會導(dǎo)致我們產(chǎn)生錯誤的安全感。而在牛血清中，支原體是最常見的微生物之一。
解決方法：通常的過濾滅菌方法對支原體沒有影響。細胞一旦被支原體污染，特別是對重要的細胞系，必須去除支原體，一般的方法有抗生素治療、抗血清治療和抗血清與補體聯(lián)合治療。值得注意的是，支原體突出的結(jié)構(gòu)特征是沒有細胞壁。因此，它對作用于細胞壁的生物合成抗生素（如 β-內(nèi)酰胺類、萬古霉素等）完-全不敏感，并且通常對多粘菌素、利福平和磺胺類藥物具有耐藥性。相反，四環(huán)素類和大環(huán)內(nèi)酯類抗生素對支原體的抑制作用最-強，而氨基糖苷類和氯霉素的抑制作用較弱。
 
黑點污染
黑色的游動點能穿透濾膜并在空氣中擴散。它們在低倍鏡下顯示為黑色圓點，在高倍鏡下顯示為可移動的黑色斑點。培養(yǎng)液也不渾濁，一般影響較小，因此細胞仍可使用。通常，黑點污染后，細胞生長良好，運動物體無明顯增加，培養(yǎng)基的顏色和透明度無明顯變化。在同一批血清培養(yǎng)的細胞中也可以發(fā)現(xiàn)類似的現(xiàn)象。
解決方法：黑點對細胞生長狀態(tài)沒有明顯影響，細胞增殖后會自然消失，因此除了血清置換外，無需特殊處理。細胞系如果細胞可能被小的運動點污染，建議增加培養(yǎng)皿細胞密度，以提高細胞存活率。
 
真菌污染
真菌污染后，培養(yǎng)基一般清澈，保持原色。細絲可以在顯微鏡下觀察到。一些真菌類似于死細胞碎片，但其中許多清晰可見，看起來像珊瑚，比較容易區(qū)分。此外，它們會慢慢長出細細的黑色細絲，因為它們生長得比較慢，不像細菌那樣容易被發(fā)現(xiàn)，一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基被污染，它們將很難存活。
解決方法：一旦被真菌污染，果斷丟棄，然后對細胞房、CO2 培養(yǎng)箱、器皿和培養(yǎng)基進行徹-底消毒。
 
原生動物污染
原生動物污染后，細胞培養(yǎng)基變得輕微渾濁。在顯微鏡下，大量的小點來回移動。細胞系雖然此時細胞仍能生長，但繁殖速度減慢，細胞生長狀態(tài)不好，邊緣不清，變得不透明。原生動物與細胞形成共生關(guān)系。同時，原生動物與細胞競爭營養(yǎng)。這種共生現(xiàn)象非常普遍，但以細胞為主，因為原生動物的數(shù)量相對較少，因而對細胞的正常生長沒有影響，只有當它們達到一定數(shù)量時，才爆發(fā)成為惡性循環(huán)。
 
解決方法：原生動物污染的原因有很多，如液體消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等，如果細胞足夠，果斷丟棄被污染的細胞和復(fù)蘇細胞。如果要保留，需要購買使用相關(guān)的滅菌試劑。